Sephadex G75ir sava veida gēla filtra pildviela ar labu veiktspēju. To sagatavo šķērssavienojums Dexstran un epichlorhidrīns. Tas ir lodītes formas želeja ar lielu daudzumu hidroksilgrupu, kuru ir viegli uzbriest ūdenī un elektrolītu šķīdumos. Šī savienojuma maksimālā izslēgšanas robeža ir 80000, un īpašā pietūkuma pakāpe ir atkarīga no sauso sveķu daudzuma un darbības apstākļiem. Piemēram, noteiktos apstākļos sauso sveķu pietūkuma pakāpe var būt 519ml/g. Kad darbības pH diapazons ir 6,210 (dažiem produktiem 5,210), savienojums var palikt stabils. Lai saglabātu tā veiktspēju un stabilitāti, ieteicams to uzglabāt istabas temperatūrā, atdzist un prom no gaismas temperatūras diapazonā no 430 grādiem (vai 425 grādiem). Šī viela ir īpaši piemērota lielām biomolekulām ar molekulmasu, kas lielāka par 80000. Galvenokārt tiek izmantots šādu lielo biomolekulu atsāļošanai un buferšķīduma nomaiņai. Izmantojot vienu - darbību, ir iespējams ātri atsāļoties, noņemt piesārņotājus un pārnest molekulas uz jaunu bufera šķīdumu. Papildus atsāļošanai un bufera nomaiņai Sephadex G-75 ir piemērots arī lielu biomolekulu attīrīšanas procesam.
 |
 |
Sephadex G75ir dekstrāna želeja, ko galvenokārt izmanto atdalīšanas un attīrīšanas tehnoloģijai bioķīmijā un molekulārajā bioloģijā. Šīs vielas galvenie lietojumi ir šādi:
Atsāšanas procesā tas var efektīvi noņemt sāļus (parasti mazu molekulu neorganiskus sāļus) no bioloģiskajiem molekulārajiem šķīdumiem. Šīs vielas priekšrocība ir tā, ka to ir viegli darbināt, ātri un var sasniegt efektīvu atsāļošanu, nemainot biomolekulu aktivitāti. Turklāt, ņemot vērā lielisko ķīmisko stabilitāti un bioloģisko savietojamību, tas ir piemērots dažādu biomolekulu, ieskaitot olbaltumvielu, peptīdu, nukleīnskābju utt., Atsāļošanas ārstēšanai, gēla atsāļošana parasti tiek apvienota ar citām attīrīšanas tehnoloģijām, piemēram, jonu apmaiņu, afinitātes hromatogrāfiju utt., Lai sasniegtu visaptverošu attīrīšanu un atdalīšanu no biomolērijas.
Šai vielai ir plašs pielietojumu klāsts bufera nomaiņā, īpaši bioķīmijas un molekulārās bioloģijas jomā. Piemēram, olbaltumvielu attīrīšanas procesā dažreiz ir nepieciešams pārnest olbaltumvielas no vienas bufer sistēmas uz citu bufera sistēmu, kas ir piemērotāka to stabilitātei un aktivitātei. Un šī viela var efektīvi sasniegt šo mērķi; Nukleīnskābju ekstrakcijas procesā ir nepieciešams arī atdalīt nukleīnskābi no šķīduma, kas satur piemaisījumus un sāļus, un pārnest to uz jaunu buferi turpmākām darbībām. Tas ir piemērojams arī šim scenārijam; Šūnu kultūras laikā dažreiz ir nepieciešams aizstāt barotni vai buferi, lai saglabātu šūnu augšanu un aktivitāti. To var izmantot, lai noņemtu kaitīgas vielas no veciem barotnēm vai buferiem un ieviestu jaunus barotnes vai buferus.
Molekulārā sijāšana
Olbaltumvielu izpētes un sagatavošanas procesos parasti ir nepieciešams atdalīt mērķa olbaltumvielas no sarežģītiem maisījumiem. Tas var atdalīt olbaltumvielas, pamatojoties uz to lielumu, tādējādi sasniedzot olbaltumvielu attīrīšanu. Pielāgojot eluācijas apstākļus, piemēram, eluenta jonu stiprumu un pH vērtību, olbaltumvielu atdalīšanas efektivitāti var vēl optimizēt. Papildus olbaltumvielām un nukleīnskābēm to var izmantot arī citu biomolekulu, piemēram, polisaharīdu, fermentu, antivielu utt., Atdalīšanai un attīrīšanai utt. Šo biomakromolekulu kustības ātrums gēlā ir atkarīgs no to lieluma un formas, lai panāktu efektīvu atdalīšanu. Lai arī šī viela netiek tieši izmantota kā molekulmasas noteikšanas līdzeklis, tā var kalpot kā palīgdarbība molekulmasas noteikšanā.
Olbaltumvielu attīrīšanas procesā parasti ir jānoņem mazu molekulu piemaisījumi, piemēram, sāļi, mazu molekulu metabolīti, nesaistīti ligandi utt. Šī viela var efektīvi noņemt šos mazos molekulas piemaisījumus no olbaltumvielu šķīdumiem, tādējādi uzlabojot olbaltumvielu tīrību. Tā molekulārā sieta efekts ļauj efektīvi noņemt šos mazo molekulu piemaisījumus, kā rezultātā rodas tīrākas nukleīnskābes. Fermentu preparāti parasti satur mazus molekulas piemaisījumus, piemēram, nereaģētus substrātus, inhibitorus, metabolītus utt. Šie piemaisījumi var ietekmēt fermentu aktivitāti un stabilitāti. Izmantojot materiāla gēla filtrēšanu, šos mazos molekulāros piemaisījumus var efektīvi noņemt, un fermenta preparāta tīrību var uzlabot. Papildus olbaltumvielām un nukleīnskābēm,
Simulēt starpšūnu signāla pārraidi
Starp šūnu signāla pārraide ir dzīvības aktivitāšu galvenais regulēšanas mehānisms, kas ietver sarežģītus procesus, piemēram, šūnu atpazīšanu, signāla pārveidošanu un fizioloģisko reakciju. Tradicionālie pētījumi bieži balstās uz dzīvu šūnu modeļiem, taču ir tādi ierobežojumi kā sarežģīti signālu tīkli un vairāki traucējoši faktori.Sephadex G75ir klasiska dekstrāna gēla filtrēšanas vide. Tās porainā struktūra un molekulārā sieta ietekme nodrošina unikālu fizisko modeli starpšūnu signāla pārvades imitēšanai.
Fizisks modelis starpšūnu signāla pārvades imitēšanai, izmantojot Sephadex G-75
Starpšūnu spraugu savienojumu simulācija
Spraugas savienojums ir hidrofīls kanāls, kas veidots starp blakus esošajām šūnām caur saiti, ļaujot brīvi apmaiņu ar mazām molekulām ar molekulmasu<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Signāla molekulu gradienta veidošanās: Gēla kolonnā tiek ielādētas dažādas signāla molekulu (piemēram, CAMP, Ca ²+) koncentrācijas. Mazo molekulu difūzijas ātruma starpību gēla porās var novērot caur molekulārā sieta efektu, un ķīmisko signālu gradienta pārnešanu starp šūnām var simulēt.
Sinerģiskā reakcijas simulācija: Divas mijiedarbīgas molekulas (piemēram, ligandu un receptoru) tiek ielādētas attiecīgi abos gēla kolonnas galos, un to saistošo kinētiku analizē, izmantojot eluācijas laika starpību, lai modelētu molekulāro atpazīšanas procesu tiešā kontakta komunikācijā starp šūnām.
Molekulārā kontakta simulācija uz membrānas virsmas
Saziņa starp membrānas virsmas molekulām ir atkarīga no šūnu membrānas virsmas olbaltumvielu specifiskās mijiedarbības. Sephadex G-75 var simulēt šo procesu, izmantojot funkcionālās modifikācijas:
Receptoru ligandu saistīšanas eksperiments: Biotinilētie receptoru proteīni (piemēram, EGFR) tiek fiksēti uz gēla daļiņu virsmas, fluorescējoši marķētie ligandi (piemēram, EGF) tiek notverti caur streptavidīna biotīna sistēmu, un saistošā signāla intensitāte tiek uzraudzīta ar fluorescences detektoru, lai kvantitētu receptoru ligšu afinitāti.
Konkurences saistīšanās analīze: Iepriekš tiek ielādēts receptoru ligandu komplekss gēla kolonnā, pievienojiet dažādu koncentrāciju (piemēram, anti EGFR antivielu) konkurences inhibitorus, aprēķiniet inhibīcijas konstanti (KI), izmantojot eluācijas maksimuma nobīdi, un simulējiet zāļu intervences efektu uz šūnu signāla ceļiem.
Ķīmiskā signāla pārraides simulācija
Ķīmiskā signāla transdukcija ir atkarīga no ķīmiskās signālmolekulu (piemēram, hormonu un citokīnu) difūzijas, ko šūnas izdala caur ķermeņa šķidrumiem vai ārpusšūnu matricu mērķa šūnām. Sephadex G - 75 var izveidot trīsdimensiju difūzijas modeli:
Parakrīna sistēmas simulācija: sekrēcijas šūnas (piemēram, makrofāgi) un mērķa šūnas (piemēram, T šūnas) ir attiecīgi iekapsulētas gēla mikrosfērās, un mērķa šūnu (piemēram, CD69 ekspresijas) aktivizācijas statuss tiek novērots, izmantojot CO kultūru, lai modelētu parakrīna signālu vietējo iedarbību.
Endokrīnā signāla pārraide: Gēla kolonnā tiek ielādēti fluorescējoši marķēti hormoni (piemēram, insulīns), un to mijiedarbība ar gēla porām tiek analizēta eluācijas laikā, un pusi -} hormonu dzīvi asinsritē un mērķa orgānu sadalījumu tiek prognozēts, apvienojot matemātiskos modeļus.
Sephadex G-75 lietošanas gadījums šūnu signalizācijas pētījumos
Pētījumi par sarkano asins šūnu signāla pārraidi un integrīna funkciju
Trombocītu adhēzijas receptoru integrīns IIB 3 ir visizplatītākais glikoproteīns uz trombocītu membrānas virsmas, un tas ir būtisks hemostāzes un trombu veidošanai. Izpētiet Sephadex G-75 izmantošanu, lai modelētu mijiedarbību starp trombocītiem un subendotēlija kolagēnu:
Integrīna aktivizācijas modelis: attīrīts integrīna IIB 3 tika fiksēts uz gēla daļiņu virsmas, un šķīstošais fibrinogēns (FG) tika pievienots kā ligands. Saistošā kinētika tika noteikta ar virsmas plazmas rezonansi (SPR). Tika konstatēts, ka integrīna afinitāte pret FG pēc aktivizācijas tika ievērojami uzlabota (KD tika samazināta no μm līdz NM).
Antiplateleta zāļu skrīnings: Iepriekšēja integrīna FG kompleksa gēla kolonnā, pievienojiet dažādu koncentrāciju (piemēram, tirofibāna) antiplateletu zāles, aprēķiniet zāļu inhibīcijas ātrumu integrīna aktivitātē, eluējot maksimālo pārvietojumu, un nodrošina augstu - caurlaides skrīninga platformu jaunu antidrombotu zāļu attīstībai.
Ar audzēju saistīto signalizācijas ceļu regulēšana
Audzēja šūnas veicina proliferāciju un metastāzes, patoloģiski aktivizējot signālu celiņus, piemēram, MAPK un PI3K/Akt. Sephadex G-75 var izmantot, lai izolētu un attīrītu galvenos olbaltumvielas signalizācijas ceļos:
EGFR signāla ceļa izpēte: EGFR olbaltumviela tika attīrīta ar Sephadex G-75 gēla filtrēšanu, un tā fosforilēšanas statuss tika analizēts ar masas spektrometriju. Tika atklāts, ka Y1068 un Y1086 EGFR fosforilēšanās līmenis pēc EGF stimulācijas tika ievērojami palielināts, kas aktivizēja ERK1/2 un Akt signālus.
Narkotiku rezistences mehānisma analīze: Zāles - izturīgas kuņģa vēža šūnas (SGC7901/VCR) UHRF1 olbaltumvielu tika izolēta un attīrīta ar Sephadex G-75, un tika atklāts, ka tā pārmērīga ekspresija var inhibēt ar apoptozi saistītās proteīni (IC IM-3-5), samazinot ķīmijterapiju.
Imūno šūnu signalizācija un polisaharīdu regulēšana
Sarkanās aļģu polisaharīdi (BFP) pastiprina imūno reakciju, aktivizējot NF - κ B un MAPK signalizācijas ceļus makrofāgos. Pētījumi par BFP un tā komponentu atdalīšanu un attīrīšanu (F1, F2, F3), izmantojot Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% tika iegūti ar Sephadex G-75 gēla filtrēšanu apvienojumā ar DEAE celulozes 52 jonu apmaiņas hromatogrāfiju, un to molekulmasa bija attiecīgi 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa un 45 kDa.
Signāla ceļa aktivizēšana: RAW264.7 makrofāgu modelī BFP un tā komponenti var ievērojami izraisīt NO un TNF - sekrēciju, un tā mehānisms ietver NF - κ B kodolieroču translokāciju un fosforilēšanu JNK, ERK un P38 MAPK. Attīrītie komponenti, kas atdalīti ar Sephadex G - 75, parādīja, ka F1 bija visspēcīgākā aktivizācijas ietekme uz NF - κ B un MAPK ceļiem (palielinot ražošanu par 2,5 reizes un TNF - sekrēcija 3 reizes).
Populāri tagi: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, piegādātāji, ražotāji, rūpnīca, vairumtirdzniecība, pirkšana, cena, lielapjoma pārdošana