BIS-TRIS buferis CAS 6976-37-0

Tas ir efektīvs bioloģisks buferis ar efektīvu pH buferizācijas diapazonu 5,8-7,2 un pKa vērtību 6,5 (25 grādi). Bioķīmiskajos eksperimentos daudzas biomolekulas, piemēram, olbaltumvielas un nukleīnskābes, ir ļoti jutīgas pret pH vērtībām, un pat nelielas pH izmaiņas var ietekmēt to struktūru un funkcijas. BIS-TRIS var stabilizēt šķīduma pH vērtību šajā pH diapazonā, nodrošinot stabilu vidi bioķīmiskām reakcijām. Olbaltumvielu atdalīšanas un attīrīšanas procesā var saglabāt proteīna dabisko konformāciju, lai novērstu denaturāciju vai nogulsnēšanos pH izmaiņu dēļ.

Piemēram, proteīnu attīrīšanas metodēs, piemēram, jonu apmaiņas hromatogrāfijā un afinitātes hromatogrāfijā,BIS-TRIS buferisvar nodrošināt, ka mijiedarbība starp proteīniem un hromatogrāfijas vidi notiek stabilos pH apstākļos, tādējādi uzlabojot attīrīšanas efektivitāti un tīrību.

Enzīmu aktivitātes pārbaudēs fermentu aktivitāte bieži ir atkarīga no noteiktas pH vides. Reakcijas sistēmas pH vērtību var precīzi kontrolēt, lai ļautu fermentam veikt katalītisko aktivitāti optimālos pH apstākļos, tādējādi precīzi mērot fermenta aktivitāti. Tam ir liela nozīme, pētot fermentu īpašības, darbības mehānismus un izstrādājot fermentu preparātus.

BIS-TRIS spēj koordinēties ar dažādiem metālu joniem un veidot stabilus kompleksus, piemēram, Zn ² ⁺ - BIS-TRIS, Mn ² ⁺ - BIS-TRIS u.c. Šiem metālu jonu kompleksiem bieži ir svarīga loma metālu biomolekulu struktūru un funkciju strukturālo analīžu izpētē. kā kofaktori, kas piedalās proteīnu aktīvo centru veidošanā. Koordinējot BIS-TRIS ar metālu joniem, proteīnu metālu jonu kompleksu struktūru var stabilizēt, atvieglojot tādu metožu izmantošanu kā rentgenstaru kristalogrāfija un kodolmagnētiskā rezonanse (KMR) strukturālai analīzei.

Piemēram, noteiktu cinku saturošu enzīmu aktīvajiem centriem ir nepieciešami cinka joni, lai uzturētu to katalītisko aktivitāti, un BIS-TRIS Zn ² ⁺ kompleksi var nodrošināt stabilu strukturālo vidi šiem fermentiem, kas palīdz precīzi analizēt to trīsdimensiju struktūras.

Nukleīnskābju pētījumos, piemēram, DNS sekvencēšanā, metālu joni var būt iesaistīti arī nukleīnskābju locīšanas un funkcionālajā regulēšanā. Koordinācija starp BIS-TRIS un metālu joniem var regulēt nukleīnskābju lokālo vidi, ietekmējot mijiedarbību starp nukleīnskābēm un olbaltumvielām, mazām molekulām utt., nodrošinot spēcīgu rīku padziļinātai-nukleīnskābju struktūras un funkciju izpētei.

BIS-TRIS ir svarīgi pielietojumi proteīnu elektroforēzes eksperimentos. SDS-PAGE (nātrija dodecilsulfāta poliakrilamīda gēla elektroforēze) un Native PAGE (nedenaturējošā poliakrilamīda gēla elektroforēze) ir izplatītas proteīnu elektroforēzes metodes.BIS-TRIS buferisbieži izmanto, lai sagatavotu elektroforēzes buferšķīdumu, lai saglabātu šķīduma pH stabilitāti elektroforēzes laikā. SDS-PAGE olbaltumvielas tiek denaturētas un negatīvi uzlādētas parauga buferšķīdumā, kas satur SDS un merkaptoetanolu, un pēc tam poliakrilamīda gēlā atdala pēc molekulu lieluma.

Tas var nodrošināt elektroforēzes bufera pH vērtības stabilitāti, ļaujot proteīniem migrēt paredzētajā veidā elektriskajā laukā, tādējādi precīzi atdalot dažādu molekulmasu proteīnus un nosakot to relatīvās molekulmasas.

Native PAGE proteīni saglabā savu dabisko konformāciju elektroforētiskai atdalīšanai. Izmantojot to, var novērst olbaltumvielu denaturāciju pH izmaiņu dēļ, saglabāt proteīnu dabisko aktivitāti un konformācijas informāciju, kā arī palīdzēt pētīt proteīnu dabisko stāvokli un mijiedarbību.

Western blotēšana ir svarīga eksperimentāla metode, ko izmanto, lai noteiktu mērķa proteīnu ekspresijas līmeni. Bis Tris propāna buferis bieži tiek izmantots kā olbaltumvielu transportēšanas buferis imūnblotēšanas eksperimentos.

Proteīna pārneses laikā no gēla uz membrānu Bis Tris propāna buferis var uzturēt stabilu pH vidi, nodrošinot, ka proteīns tiek pārnests uz membrānu ar pareizu konformāciju un lādiņa stāvokli. Tas ir ļoti svarīgi turpmākai antivielu saistīšanai un signāla noteikšanai.

Ja olbaltumvielās tiek veikta denaturācija vai konformācijas izmaiņas pārvietošanas procesā, tas var izraisīt to, ka antivielas nespēj precīzi atpazīt mērķa proteīnu, tādējādi ietekmējot eksperimentālo rezultātu precizitāti. Tāpēc Bis Tris propāna buferim ir izšķiroša loma imūnblotēšanas eksperimentos, palīdzot uzlabot eksperimentu jutīgumu un uzticamību.

Šūnu kultūra ir svarīga tehnoloģija biomedicīnas pētījumos, un šūnu kultūras barotnes pH vērtībai ir būtiska ietekme uz šūnu augšanu un vielmaiņu. BIS-TRIS propāna buferšķīdumu var izmantot šūnu kultūras barotnes sagatavošanai, lai šūnu kultivēšanas procesā uzturētu stabilu pH vērtību.

Dažādu veidu šūnām ir atšķirīgas pH prasības, bet parasti tām nepieciešama augšana vidē, kas ir tuvu fizioloģiskajam pH līmenim (apmēram 7,2–7,4).

BIS-TRIS propāna buferis var buferēt barotnes pH izmaiņas šūnu kultivēšanas laikā, novērst pH svārstības, ko izraisa vielmaiņas produktu uzkrāšanās, gāzu apmaiņa un citi faktori, un nodrošināt stabilu šūnu augšanas vidi. Tam ir liela nozīme normālai šūnu augšanai, proliferācijai un funkcionālai ekspresijai, palīdzot uzlabot šūnu kultūras panākumu līmeni un eksperimentālo rezultātu ticamību.

Nukleīnskābju elektroforēze ir plaši izmantota metode mērķa nukleīnskābju garuma un koncentrācijas noteikšanai, ieskaitot DNS un RNS elektroforēzi. Piemērots nukleīnskābju elektroforēzes eksperimentiem, tas var uzturēt elektroforēzes bufera pH stabilitāti.

Nukleīnskābju elektroforēzē nukleīnskābes molekulas migrē elektriskā lauka iedarbībā, pamatojoties uz to izmēru un lādiņa īpašībām.

Tas var nodrošināt šķīduma pH vērtības stabilitāti elektroforēzes laikā, ļaujot nukleīnskābju molekulām migrēt paredzētajā veidā, tādējādi precīzi atdalot dažāda garuma nukleīnskābju fragmentus un nosakot to koncentrāciju. Tam ir liela nozīme tādos pētījumos kā gēnu klonēšana, gēnu ekspresijas analīze un nukleīnskābju sekvencēšana.

BIS-TRIS var izmantot arī kreatīnkināzes noteikšanai. Kreatīnkināze ir svarīgs enzīms, kam ir izšķiroša nozīme muskuļu enerģijas metabolismā. Tās aktivitātes noteikšanai ir liela nozīme muskuļu slimību diagnostikā un sporta traumu izvērtēšanā. Kreatīnkināzes noteikšanas eksperimentā var uzturēt reakcijas sistēmas pH stabilitāti, lai nodrošinātu, ka enzīms uzrāda katalītisko aktivitāti optimālos pH apstākļos. Precīzi kontrolējot pH vērtību, var uzlabot kreatīnkināzes aktivitātes mērījumu precizitāti un uzticamību, nodrošinot spēcīgu atbalstu klīniskajai diagnostikai un pētījumiem.

BIS{0}}TRIS arī spēlē nozīmīgu lomu hemoglobīna izpētē un lietošanā. Hemoglobīna atdalīšanas procesā var saglabāt tā stabilitāti un aktivitāti, lai novērstu denaturāciju vai agregāciju pH izmaiņu dēļ. Tam ir liela nozīme hemoglobīna attīrīšanā un strukturālajā izpētē.

BIS-TRIS var efektīvi aizsargāt hemoglobīnu saldēšanas{1}}žāvēšanas procesā. Liofilizētā žāvēšana ir plaši izmantota bioloģisko produktu konservēšanas metode, taču olbaltumvielas var tikt bojātas saldēšanas un žāvēšanas procesā. Tas var nodrošināt stabilu vidi hemoglobīnam sasaldēšanas{4}}žāvēšanas procesā, samazināt olbaltumvielu denaturāciju un inaktivāciju, kā arī uzlabot hemoglobīna aktivitāti un stabilitāti pēc žāvēšanas ar sasaldēšanu.

IEF (izoelektriskā fokusēšanas elektroforēze) un 2-D gēla elektroforēze ir izplatītas metodes proteomikas pētījumos, ko izmanto, lai atdalītu un analizētu sarežģītus proteīnu maisījumus. BIS-TRIS var izmantot kā katoda elektrolītu IEF/2-D gēla elektroforēzei.

IEF procesa laikā proteīni migrē un fokusējas pH gradientā, pamatojoties uz to izoelektrisko punktu. BIS-TRIS katolīts var uzturēt elektroforēzes buferšķīduma pH stabilitāti, nodrošinot, ka proteīni var precīzi migrēt uz to izoelektrisko punktu izoelektriskās fokusēšanas procesa laikā. 2-D gēla elektroforēzē, izmantojotBIS-TRIS buferispalīdz arī uzlabot proteīnu atdalīšanas efektu un izšķirtspēju, nodrošinot augstas kvalitātes{0}}datus proteomikas pētījumiem.