Agarozes pulverisir organiska viela ar ķīmisko formulu c24h38o19. Tā ir balta vai dzeltena lodītes, piemēram, gēla daļiņa vai pulveris, kas ir lineārs polimērs, un pamatstruktūra ir pārmaiņus saistīta ar 1,3 - D-galaktozi un 1,4-saistītu 3,6-endoētera-l-galaktozi.
Agara pektīns ir neviendabīgs maisījums, kas sastāv no daudzām mazākām molekulām. Agarozi parasti karsē virs 90 grādiem, lai izšķīdinātu ūdenī, un, kad temperatūra nokrītas līdz 35-40 grādiem, tā veido labu puscietu želeju, kas ir tās dažādo lietojumu galvenā iezīme un pamats. Agarozes gela veiktspēju parasti izsaka ar želejas stiprumu. Jo augstāks stiprums, jo labāka ir želejas veiktspēja.
Agarozes pulveris, saīsināti kā Ag, ir neuzlādēta neitrāla agara sastāvdaļa, kas tiek tulkota arī kā agaroze vai agaroze. Agarozes ķīmiskā struktūra ir saistīta ar 1,3 - D-galaktozi un 1,4-saistītu 3,6-endoētera-l-galaktozi.
Agarozi iegūst no sarkano aļģu polisaharīda, un tās galvenā sastāvdaļa ir poligalaktoze, no kuras aptuveni 70% ir agaroze un 30% ir sazarotās ķēdes agaroze. Agarozei ir lineāra struktūra, un to šķērso D-galaktoze un 3,6-dehidrētā galaktoze - 1, 4 un - 1, 3 savienojumi pārmaiņus veido atkārtotas disaharīdu vienības. Sazarotās ķēdes agaroze tika iegūta no - 1, 3 saites atdala citu ķēdi. Materiāls, kas iegūts no jūraszālēm ar karstu ūdeni, satur apmēram 40% agara. Tirdzniecībā pieejamais agars (pazīstams kā agars) bieži ir lokšņu vai vaļīgas virves formā, un to parasti izmanto kā ēdamo gumiju, zāļu iepakošanas līdzekli vai baktēriju barotni. Tīru agarozi bieži izmanto bioķīmiskajās laboratorijās kā puscietu atbalstu elektroforēzē, hromatogrāfijā un citās tehnoloģijās bioloģisko makromolekulu vai mazu molekulu atdalīšanai un analīzei.
Agarozes ražošanas procesu var iedalīt četrās daļās: pirmapstrāde, ekstrakcija, DEAE celulozes apstrāde un dehidratācija
1) Iepriekš apstrādātās pulverveida izejvielas tiek tieši žāvētas 80 ° C temperatūrā 1/2 stundas. sloksnes un bloku izejvielas nomazgā ar ūdeni, sagriež mazos gabaliņos un cep iekšā
2) Ekstrakcija: pēc maisīšanas un ekstrahēšanas ar etiķskābes nātrija acetāta jauktu estera šķīdumu vairākas stundas, atsūknējiet ūdeni, nomazgājiet, pēc tam samaisiet un vairākas stundas ekstrahējiet ar nātrija karbonāta nātrija bikarbonāta buferšķīdumu, pēc tam sūknējiet, filtrējiet un mazgājiet ar ūdeni.
3) Agara gēlu, kas ekstrahēts ar buferšķīdumu, izšķīdina 4% šķīdumā, karsējot ar ūdeni, un pēc tam pievieno DEAE celulozi maisīšanai 3-4 stundas, saglabājot siltumu, un pēc tam centrifugē. Filtrātu savāc un filtrē, lai iegūtu baltu šķīdumu koloidālā stāvoklī
4) Dehidratācija: pēc baltā filtrāta karsēšanas ātri pievieno 95% etanolu, maisot, līdz nav redzamu nokrišņu, atdzesē līdz istabas temperatūrai, izlej augšējā slāņa šķīdumu, mazgā un nosusina nogulsnes, lai iegūtu produktu ar iznākumu 71%.
Reaģenta reģenerācija DEAE celulozes atgūšana: pēc centrifugēšanas nogulsnes uzvāra ar ūdeni, filtrē uz 100 acu zīda auduma, atkārto vairākas reizes, līdz filtrāts ir dzidrs, pēc tam mazgā ar 0,5 mol/1 HCI, 0,5 mol/1 NaOH un ūdeni un žāvē. Atgūšanas ātrums ir 95 %. 80 C frakcija tika savākta, tieši destilējot etanola ūdens šķīdumu, kas iegūts no Yichun ūdens šķīduma. Pēc tam pievieno cieto nātrija hlorīdu līdz piesātinājumam un turpina destilāciju. Var uzlādēt . 70%. Pēc tam, kad nātrija hlorīds pudelē ir iztvaikojis, to var arī uzlādēt ar vārstu.
Agarozes pulverisir polisaharīds, kas iegūts no jūraszālēm un ir agara galvenā sastāvdaļa. Kopš tās atklāšanas tas ir plaši izmantots daudzās jomās, pateicoties tā unikālajām fizikālajām un ķīmiskajām īpašībām, piemēram, želejas veidošanas spējai, termiskajai stabilitātei, ķīmiskajai stabilitātei un bioloģiskā saderībai. Tālāk ir sniegts detalizēts tā mērķa skaidrojums:
Agarozes gēla elektroforēze ir viena no visbiežāk izmantotajām atdalīšanas un analīzes metodēm molekulārajā bioloģijā. Kā gēla elektroforēzes līdzeklis agarozei ir liela poru izmēra, plaša atdalīšanas diapazona un vienkāršas darbības priekšrocības. Elektroforēzes procesā bioloģiskās makromolekulas, piemēram, DNS, RNS vai proteīns, migrē caur agarozes gēla porām elektriskā lauka iedarbībā. Pateicoties dažādu molekulu lādiņa, izmēra un formas atšķirībām, to migrācijas ātrums gēlā ir atšķirīgs, tādējādi panākot atdalīšanos. Agarozes gēla elektroforēzi plaši izmanto gēnu klonēšanai, gēnu ekspresijas analīzē un gēnu mutāciju noteikšanā. To parasti izmanto kā atbalstu vai matricu šūnu kultūrā. Pateicoties lieliskajai bioloģiskajai saderībai un ķīmiskajai stabilitātei, agaroze var nodrošināt stabilu šūnu augšanas vidi. Piemēram, mīksto agara koloniju veidošanas eksperimentā agarozi izmanto, lai sagatavotu daļēji{7}}cietu barotni, lai noteiktu šūnu koloniju veidošanās spēju, kam ir liela nozīme šūnu ļaundabīgās transformācijas pakāpes novērtēšanā.
Turklāt agarozi var kombinēt arī ar citiem biomateriāliem, lai sagatavotu kompozītu sastatņu materiālus izmantošanai audu inženierijā un reģeneratīvajā medicīnā. Agarozes gelam ir arī svarīga loma imūndifūzijā un imūnelektroforēzē. Šajās tehnoloģijās agarozes gēls kā antigēna un antivielu reakcijas vide var veidot skaidras nogulsnes līnijas vai gredzenus, ko var izmantot, lai noteiktu un analizētu antigēna vai antivielu klātbūtni un koncentrāciju. Agarozes gēla poru izmērs un lādiņa īpašības var ietekmēt antigēna un antivielu difūzijas ātrumu un saistīšanās efektivitāti, tāpēc eksperimentālos apstākļus var optimizēt, pielāgojot agarozes koncentrāciju un veidu.
Pielietojums molekulārās bioloģijas eksperimentos
Agarozes gēla elektroforēzi var izmantot ne tikai DNS un RNS atdalīšanai, bet arī kombinēt ar citām tehnoloģijām, lai panāktu to attīrīšanu. Piemēram, DNS ekstrakcijas procesā var izmantot agarozes gēla elektroforēzi, lai noteiktu DNS integritāti un tīrību, un pēc tam mērķa DNS segmentu var atdalīt no gēla ar gēla griešanu un atgūšanu. Šīs metodes priekšrocības ir vienkārša darbība un augsts atkopšanas ātrums. Nukleīnskābju hibridizācijas eksperimentos agarozes želeju var izmantot kā cietās fāzes balstu, lai fiksētu DNS vai RNS zondes uz gēla un pēc tam hibridizētu ar iezīmēto mērķa nukleīnskābi. Nosakot hibridizācijas signālu klātbūtni un intensitāti, var noteikt mērķa nukleīnskābju klātbūtni un koncentrāciju.
Agarozes gēla poru izmērs un lādiņa īpašība var ietekmēt zondes un mērķa nukleīnskābes saistīšanās efektivitāti, tāpēc hibridizācijas apstākļus var optimizēt, pielāgojot agarozes koncentrāciju un veidu. Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) ir viena no visbiežāk izmantotajām metodēm molekulārajā bioloģijā DNS pastiprināšanai. PCR produktu analīzē agarozes gēla elektroforēze ir viena no visbiežāk izmantotajām metodēm. Atdalot PCR produktus, izmantojot elektroforēzi, var noteikt pastiprināto fragmentu lielumu un tīrību, tādējādi nosakot, vai PCR reakcija ir veiksmīga un vai pastāv nespecifiskas amplifikācijas problēmas.
Lai gan agarozes gela poru izmērs ir salīdzinoši liels, tas nav piemērots mazu molekulāro proteīnu atdalīšanai, taču dažos gadījumos to joprojām var izmantot olbaltumvielu atdalīšanai un attīrīšanai. Piemēram, preparatīvā gēla elektroforēzē agarozes želeju var izmantot, lai atdalītu un attīrītu proteīnus ar lielāku molekulmasu. Turklāt agarozi var kombinēt arī ar citiem materiāliem, lai sagatavotu kompozītu želeju, lai paplašinātu atdalīšanas diapazonu un uzlabotu atdalīšanas efektivitāti. Dažos enzīmu aktivitātes noteikšanas eksperimentos agarozes želeju var izmantot kā nesēju enzīmu imobilizācijai. Enzīma imobilizācija uz agarozes gēla var saglabāt fermenta aktivitāti un stabilitāti un atvieglot fermenta atdalīšanu un atgūšanu no reaģentiem. Šai metodei ir plašs pielietojums fermentu inženierijas jomā.
Pielietojums mikrobioloģijā
Agarozi parasti izmanto kā koagulantu mikrobu barotnēs. Salīdzinot ar agaru, agarozei ir augstāka tīrība un mazāks piemaisījumu saturs, tāpēc tā ir piemērotāka mikrobu audzēšanai. Sagatavojot cieto barotni, izšķīdiniet agarozi karstā ūdenī, pēc tam pievienojiet citas barības vielas un antibiotikas un atdzesējiet, lai izveidotu cietu barotni. Šāda veida barotne var nodrošināt stabilu vidi mikroorganismu augšanai, atvieglojot to izolēšanu, attīrīšanu un identificēšanu. Mikrobioloģiskās identifikācijas eksperimentos agarozes želeju var izmantot specifisku identifikācijas barotņu sagatavošanai. Piemēram, identificējot zarnu baktērijas, specifiskus cukurus saturošu agarozes barotni var izmantot, lai atšķirtu dažāda veida baktērijas, novērojot to cukuru fermentāciju. Turklāt agarozes želeju var izmantot arī, lai sagatavotu bioķīmisko reakciju vidi mikroorganismiem, lai noteiktu to vielmaiņas īpašības un enzīmu aktivitātes.
Agarozes pulverisparasti tiek uzkarsēts līdz virs 90 grādiem, lai izšķīdinātu ūdenī, un, kad temperatūra nokrītas līdz 35-40 grādiem, tas veido labu puscietu želeju, kas ir tā dažādo lietojumu galvenā iezīme un pamats. Agarozes gela veiktspēju parasti izsaka ar želejas stiprumu. Jo augstāks stiprums, jo labāka ir želejas veiktspēja. Agarozes želeju izraisa ūdeņraža saites. Jebkurš faktors, kas var iznīcināt ūdeņraža saites, var izraisīt želejas iznīcināšanu. Agaroze ir hidrofila un gandrīz pilnīgi bez lādētām grupām. Tas reti izraisa denaturāciju un adsorbciju jutīgās bioloģiskās makromolekulās. Tas ir ideāls inerts nesējs. Agarozes sagatavošanas procesā ir nepieciešams pēc iespējas vairāk noņemt agara pektīnu, pretējā gadījumā var būt ļoti mazs sulfāta un pirovīnskābes daudzums, lai aizstātu jonizējošo grupu agarozē, kas izraisīs elektroosmozi (EEO) un ietekmēs daļiņu kustību. Labas kvalitātes agarozes sulfātu saturs ir salīdzinoši zems, parasti zem 0,2%, un elektroosmoze ir salīdzinoši maza, parasti zem 0,13. Tāpēc agaroze ir tik dārgāka nekā agars.
1937. gadā Araki pirmo reizi atdalīja agarozi no agara, taču tikai 1961. gadā hjertins pirmo reizi atklāja lielisko agarozes darbību, piesaistīja arvien lielāku uzmanību un sāka rūpniecisko ražošanu. Agarozi plaši izmanto klīniskajos testos, bioķīmiskajā analīzē un biomakromolekulu atdalīšanā.
Agarozes pulveris ir būtisks instruments molekulārajā bioloģijā un biotehnoloģijā ar plašu pielietojumu klāstu gēla elektroforēzē, afinitātes hromatogrāfijā, imūndifūzijā un imūnelektroforēzē. Tā unikālās īpašības, piemēram, lietošanas vienkāršība, daudzpusība, zema toksicitāte un izmaksu -efektivitāte, padara to par neatņemamu laboratorijas pētījumu sastāvdaļu. Neskatoties uz ierobežojumiem, piemēram, ierobežoto izšķirtspēju un trauslumu, jaunākie sasniegumi agarozes gēlu tehnoloģijā, tostarp augstas -izšķirtspējas gēli, iepriekš lietie gēli un mikrofluidiskās ierīces, kuru pamatā ir agaroze-, ir paplašinājuši tās lietderību un uzlabojuši tā veiktspēju. Zinātniskajiem pētījumiem turpinot attīstīties, agarozes pulveris neapšaubāmi joprojām būs vērtīgs un būtisks reaģents molekulārās bioloģijas un biotehnoloģijas instrumentu komplektā.
Populāri tagi: agarozes pulveris cas 9012-36-6, piegādātāji, ražotāji, rūpnīca, vairumtirdzniecība, pirkt, cena, vairumā, pārdošana