Proteināzes K pulveris CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. ir viens no pieredzējušākajiem proteāzes k pulvera cas 39450-01-6 ražotājiem un piegādātājiem Ķīnā. Laipni lūdzam vairumtirdzniecībā augstas kvalitātes proteināzes k pulvera cas 39450-01-6 pārdošanai šeit no mūsu rūpnīcas. Ir pieejams labs serviss un saprātīga cena.

Proteināzes K pulverisir ļoti efektīva, ne-specifiska serīna proteāze, ko plaši izmanto molekulārajā bioloģijā un bioķīmijā, galvenokārt proteīnu noārdīšanai un piesārņojošo proteīnu noņemšanai no nukleīnskābju preparātiem. Tas ir iegūts no sēnītes Engyodontium album (agrāk Tritirachium album) un saglabā savu aktivitāti plašā temperatūras diapazonā (20–60 grādi) un pH (4–12), pat ja to denaturēšanas apstākļos inkubē šķīdumā, kas satur SDS (0,5–1%) vai urīnvielu (4M).

Enzīms efektīvi sadala plašu proteīnu klāstu, tostarp RNāzi un DNāzi, sašķeļot peptīdu saites (vēlams, hidrolizējot alifātisko/aromātisko aminoskābju karboksilgalu), un tāpēc to izmanto nukleāzes noņemšanai DNS/RNS ekstrakcijā, lai nodrošinātu nukleīnskābju integritāti. Turklāt to parasti izmanto audu gremošanu (piem., parafīna-iegulto paraugu), šūnu līzes un proteomikas pētījumos.

Proteināzes K pulveris parasti tiek piegādāts liofilizētā veidā, kas ir ļoti stabils (-20 grādi ilgstošai uzglabāšanai) un pirms lietošanas jāizšķīdina buferšķīdumā (piemēram, Tris-HCl, EDTA). Tā aktivitāte ir atkarīga no Ca²⁺, bet helātu veidojošie aģenti, piemēram, EDTA, tikai daļēji inhibē enzīmu aktivitāti. Apstrādes laikā ir jāizvairās no pašsaārdīšanās, un ieteicama siltuma inaktivācija 65 grādu temperatūrā. Pateicoties tā spēcīgajai proteīnu hidrolīzes spējai, ir nepieciešama rūpīga aizsardzība, lai izvairītos no saskares ar ādu vai gļotādu.

Proteināzes k pulveris, kas pazīstams arī kā Proteinase K vai EC 3.4.21.14, ir serīna proteāze, kas izolēta un attīrīta no Tritirachium album Limber. Kopš tās pirmās izolācijas, ko veica Volfgangs Ebelings et al. 1974. gadā proteināze K tika plaši izmantota bioķīmijā, molekulārajā bioloģijā, medicīnā un rūpniecībā, pateicoties tās augstajai aktivitātei un plašajai substrāta specifikai.

DNS un RNS ekstrakcijas procesā proteināzes K galvenā funkcija ir noārdīt ar nukleīnskābēm saistītos proteīnus, ļaujot DNS vai RNS būt brīvam šķīdumā turpmākai ekstrakcijai un attīrīšanai. Pateicoties tās stabilitātei un augstajai aktivitātei denaturējošajos līdzekļos, piemēram, urīnviela un SDS, proteināzi K parasti izmanto plazmīdu vai genoma DNS un RNS izolēšanai.

proteināze K var inhibēt RNS aktivitāti un aizsargāt RNS no degradācijas.

1. DNS un RNS ekstrakcija

 

DNS ekstrakcija: Proteāze K var hidrolizēt histonus, kas saistās ar DNS, ļaujot DNS disociēt šķīdumā. Pēc tam piemaisījumi tika noņemti, izmantojot dažādas metodes, piemēram, fenola hloroforma ekstrakciju, etanola izgulsnēšanu utt., Un tika savākta attīrīta DNS.
RNS ekstrakcija: RNS ekstrakcijas procesā RNS fermenti parasti atrodas vidē, un pati paraugu sistēma var saturēt arī RNS enzīmus, padarot RNS ļoti jutīgu pret degradāciju. Pievienojot nelielu daudzumu

2. In situ hibridizācijas tehnoloģija

 

In situ hibridizācijas tehnoloģija proteāzi K parasti izmanto pirms hibridizācijas apstrādei, lai sagremotu proteīnus, kas ieskauj mērķa DNS, palielinātu iespēju zondei saistīties ar mērķa nukleīnskābi un pastiprinātu hibridizācijas signālu. Tomēr jāņem vērā, ka, ja proteināzes K koncentrācija ir pārāk augsta, gremošanas laiks ir pārāk garš vai inkubācijas temperatūra ir pārāk augsta, tas var izraisīt šūnu struktūras bojājumus, izraisot audu sekciju izkliedi un šūnu kodolu izzušanu, tādējādi ietekmējot hibridizācijas rezultātus. Tāpēc praktiskos lietojumos ir stingri jākontrolē proteināzes K koncentrācija un apstrādes laiks.

3. Vīrusu inaktivācija un dezinfekcija

 

Proteāzi K, pateicoties tās spēcīgajai proteolītiskajai aktivitātei, var izmantot vīrusu inaktivācijai un dezinfekcijai. Pētījumi liecina, ka tīra ūdens un sadzīves notekūdeņu attīrīšana ar noteiktu proteināzes K koncentrāciju var efektīvi inaktivēt vīrusus. Proteāze K kā vīrusu inaktivējošs dezinfekcijas līdzeklis var samazināt parasto oksidatīvo ķīmisko dezinfekcijas līdzekļu iespējamo kaitējumu cilvēka ķermenim, un tās ražošana un transportēšana ir droša bez neatgriezeniska vides piesārņojuma.

4. Western blotēšana un impulsa elektroforēze

 

Proteāze K ir plaši izmantota arī hromosomu DNS sagatavošanā impulsu elektroforēzei, Western blotēšanai un citiem eksperimentiem. Western blot eksperimentos proteināzi K var izmantot, lai noņemtu no parauga nespecifiskus proteīnus, tādējādi uzlabojot blota specifiskumu un jutīgumu. Impulsa elektroforēzes eksperimentos proteināze K var noārdīt proteīnu piemaisījumus DNS paraugos un uzlabot elektroforēzes efektivitāti.

5. Olbaltumvielu noteikšana un identifikācija

 

Proteināzes k pulverisvar izmantot arī noteiktu proteīnu noteikšanai un identificēšanai. Piemēram, pētot transmisīvo sūkļveida encefalopātiju (TSE), proteināzi K var izmantot proteīnu sagremošanai smadzeņu audu paraugos un prionu proteīnu klātbūtnes noteikšanai, nosakot patogēno prionu rezistenci pret proteināzi K. Turklāt proteināzi K var izmantot arī tādiem eksperimentiem kā enzīmu lokalizācijas noteikšanai uz šūnu membrānām un toksīnu retranslācijas olbaltumvielām. lizocīms un ribonukleāze A).

1. Medicīnas joma

 

Klīniskā lietošana: Proteāzei K ir noteikta medicīniska vērtība medicīnā. Piemēram, gremošanas traucējumus ārstē ar kuņģa proteāzi, bronhītu ar skābo proteāzi, vaskulītu ar elastāzi u.tml.. Turklāt tripsīnu, himotripsīnu u.c. parasti izmanto arī ķirurģisku strutojošu brūču attīrīšanai un pleiras serozālo saaugumu ārstēšanai.
Vīrusu noteikšana un diagnostika: Proteāzei K ir arī potenciāls pielietojums vīrusu noteikšanā un diagnostikā. Sagremojot vīrusa paraugā esošās olbaltumvielas un pakļaujot vīrusa nukleīnskābi, tas nodrošina ērtības turpmākai nukleīnskābju pārbaudei.

2. Rūpniecības sektors

 

Ādas rūpniecība: Protease K izmanto ādas rūpniecībā matu noņemšanai un mīkstināšanai, kas var ietaupīt laiku un uzlabot darba higiēnas apstākļus.
Tekstilrūpniecība: Proteāzi K var izmantot tekstilrūpniecībā, piemēram, zīda atslāņošanā.
Pārtikas rūpniecība: Proteāzi K var izmantot pārtikas rūpniecībā gaļas mīkstināšanai, spirta dzidrināšanai utt.
Mazgāšanas līdzeklis: Veļas mazgāšanas līdzeklis ar fermentu piedevu ir jauns produkts mazgāšanas līdzekļos. Veļas mazgāšanas līdzeklis, kas satur sārmainu proteāzi, var noņemt no drēbēm asins traipus un olbaltumvielu netīrumus. Bet, to lietojot, uzmanieties, lai nepieskartos ādai, lai nesabojātu proteīnu uz ādas virsmas un neizraisītu alerģiskas reakcijas, piemēram, izsitumus un ekzēmu.

Strukturālās īpašības

 

Proteināzes K molekulmasa ir aptuveni 28 900 daltoni (28, 9 kDa), un literatūrā ir arī ziņojumi par 29, 3 kDa. Tā aminoskābju secība un trīsdimensiju telpiskā struktūra ir ļoti līdzīga serīna proteāzes saimes subtilizīnam, taču ir arī dažas unikālas iezīmes.

Disulfīda saišu struktūra: Proteāzes K molekulas satur disulfīda saites, kas palielina to stabilitāti un ļauj tām saglabāt aktivitāti plašā pH diapazonā un augstas temperatūras apstākļos.
Ca ² ⁺ saistīšanās vietas:Proteināzes k pulverissatur divas Ca ² ⁺ saistīšanās vietas, kas, lai arī tālu no aktīvā centra, ir būtiskas fermenta katalītiskās aktivitātes uzturēšanai. Ca ² ⁺ noņemšana novedīs pie tā, ka proteāze K zaudēs aptuveni 80% savas aktivitātes, un, atkārtoti ievadot Ca ² ⁺, tā aktivitāti var atjaunot tikai daļēji.
Katalītiskā triāde: Proteāzei K ir katalītiskā triāde Asp-His69-Ser224, kas ir tās hidrolītiskās aktivitātes galvenā struktūra.

Darbības mehānisms

 

Proteāze K var galvenokārt hidrolizēt esteru un peptīdu saites, kas atrodas blakus hidrofobo aminoskābju C-galam, sēru- saturošām aminoskābēm un aromātiskajām aminoskābēm, hidrolizējot olbaltumvielas īsos peptīdos. Tās darbības mehānisms galvenokārt ietver šādas darbības:

Enzīma substrāta saistīšanās: pēc proteāzes K sajaukšanas ar substrātu substrāts saistās ar enzīma aktīvo vietu, veidojot enzīma substrāta kompleksu.
Katalītiskā reakcija: aktīvās vietas iedarbībā substrāta peptīdu saite tiek hidrolizēta, veidojot produktu, kas atdalīts no fermenta.
Proteāzes K spēcīgais degradācijas efekts padara to par galveno reaģentu dažādās bioķīmiskās reakcijās, īpaši DNS un RNS ekstrakcijas procesos. Proteāze K var efektīvi noārdīt ar nukleīnskābēm saistītos proteīnus, atbrīvot nukleīnskābes un inhibēt nukleāžu aktivitāti, samazinot nukleīnskābju noārdīšanos ekstrakcijas laikā.

Proteināzes k pulveris, kā ļoti aktīvai un substrātam specifiskai serīna proteāzei, ir plašs pielietojums bioķīmijā, molekulārajā bioloģijā, medicīnā un rūpniecībā. Tas var noārdīt olbaltumvielas, kas saistās ar nukleīnskābēm un atbrīvo nukleīnskābes; Palielināt iespēju zondēm saistīties ar mērķa nukleīnskābēm in situ hibridizācijas tehnoloģiju; Izmanto vīrusu inaktivācijai un dezinfekcijai; Noņemiet proteīnu piemaisījumus Western blot un impulsa elektroforēzes eksperimentos; Piemīt ārstnieciska vērtība medicīnas jomā; Izmanto tādās rūpniecības jomās kā ādas apstrāde, tekstilrūpniecība, pārtikas rūpniecība un mazgāšanas līdzekļu ražošana. Tomēr, lietojot proteināzi K, uzmanība jāpievērš tās uzglabāšanas metodei un lietošanas apstākļiem, lai nodrošinātu tās stabilitāti un aktivitāti.

Proteināze K ir plaša-spekta serīna proteāze, ko plaši izmanto molekulārajā bioloģijā, bioķīmijā un medicīnas pētniecības jomās, pateicoties tās unikālajām fermentatīvām īpašībām un stabilitātei. Proteināzes K pulverim kā liofilizētam -kaltētam pulvera veidam ir izšķiroša nozīme tādos eksperimentos kā nukleīnskābju ekstrakcija, olbaltumvielu šķelšana un audu homogenizācija. Tomēr jebkura bioloģiskā reaģenta lietošana ir saistīta ar potenciāliem riskiem, un tā nevēlamās reakcijas var būt saistītas ar operatoru veselību un eksperimentālās vides drošību.

Populāri tagi: proteinase k pulveris cas 39450-01-6, piegādātāji, ražotāji, rūpnīca, vairumtirdzniecība, pirkt, cena, vairumā, pārdošanai