Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. ir viens no pieredzējušākajiem 3xflag peptīda cas 402750-12-3 ražotājiem un piegādātājiem Ķīnā. Laipni lūdzam vairumtirdzniecībā augstas kvalitātes 3xflag peptīda cas 402750-12-3 pārdošanai šeit no mūsu rūpnīcas. Ir pieejams labs serviss un saprātīga cena.
3XFLAG peptīdsir svarīga peptīdu marķieru secība, ko plaši izmanto proteīnu ekspresijas un attīrīšanas procesos biomedicīnas pētījumos. Molekulārā formula C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Sastāv no 23 aminoskābēm, tā secība satur trīs atkārtotus Asp Tyr Lys Xaa Xaa Asp motīvus, kas piešķir tai specifiskas struktūras iezīmes.
Labi šķīst īpašos šķīdinātājos. Piemēram, DMSO tā šķīdība ir augsta, padarot to ērtu operācijām un eksperimentiem šķīdumā. Turklāt tas var arī sasniegt labu šķīdināšanas efektu ūdenī, viegli karsējot. Tam ir arī dažas īpašas īpašības. Piemēram, tam ir laba antigenitāte un reaktivitāte, un tas var saistīties ar specifiskām anti-FLAG antivielām. Šī saistīšanās spēja padara to plaši pielietojamu tādos eksperimentos kā imunoprecipitācija. Konkurētspējīgi saistoties ar Anti FLAG antivielām, FLAG sapludinātais proteīns, kas saistās ar Anti FLAG antivielām, var tikt eluēts imunoprecipitācijas laikā, tādējādi panākot mērķa proteīna lokalizāciju, noteikšanu un attīrīšanu.
|
Pielāgoti pudeļu vāciņi un korķi:
|
|
|
Ķīmiskā formula |
C120H169N31O49S |
|
Precīza Mise |
2860 |
|
Molekulmasa |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Elementu analīze |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
3XFLAG peptīdsir proteīnu pētījumos izmantots tags, kas sastāv no 8 aminoskābēm ar secību DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. Tās galvenā funkcija ir kalpot par proteīnu ekspresijas un attīrīšanas marķieri, nodrošinot ērtu un efektīvu līdzekli pētniecībā.
1. Afinitātes attīrīšana:
To var izmantot kā etiķeti olbaltumvielu attīrīšanai, un, pateicoties tā augstajai afinitātei ar anti-FLAG antivielām, mērķa proteīnu var viegli attīrīt. Parasti mērķa proteīnu kotransfektē šūnās ar ekspresijas vektoru, kas satur 3X FLAG PEPTĪDU, un pēc tam attīra ar afinitāti, izmantojot anti FLAG antivielas, lai ātri un efektīvi iegūtu augstas tīrības pakāpes mērķa proteīnu.
2. Imunoloģiskā pārbaude:
Pateicoties tā augstajai imunogenitātei, to var izmantot olbaltumvielu ekspresijas un lokalizācijas noteikšanai. Izmantojot specifiskas anti-FLAG antivielas, var veikt eksperimentālas metodes, piemēram, imūnblotēšanu un imunofluorescences krāsošanu, lai ātri un precīzi noteiktu mērķa proteīnu ekspresijas līmeni un izplatību.
3. Klonu filtrēšana:
To var izmantot arī proteīna klonu skrīninga ērtībām. Olbaltumvielu ekspresijas vektoru konstruēšanas procesā mērķa proteīna gēnu secības savienošana ar 3XFLAG secību var atvieglot pozitīvo klonu skrīningu ar mērķa proteīnu, izmantojot imūndetekcijas un citas metodes, tādējādi paātrinot proteīna funkciju izpētes procesu.
4. Imunoprecipitācija:
To var izmantot arī proteīnu imunoprecipitācijas eksperimentiem. Saistot olbaltumvielas, kas satur 3X FLAG PEPTĪDA tagus, ar anti FLAG antivielām un pēc tam izmantojot adsorbcijas materiālus, piemēram, proteīna A/G agarozi vai magnētiskās lodītes, mērķa proteīnu un tā mijiedarbības partnerus var selektīvi izgulsnēt no šūnu ekstraktiem, lai pētītu proteīnu mijiedarbības tīklu.
5. Zāļu skrīnings:
To var izmantot arī narkotiku skrīninga pētījumos. Apvienojot 3X FLAG PEPTIDE tagu ar interesējošo proteīnu, var panākt proteīna augstas -caurlaidības skrīningu. Šo skrīninga metodi var izmantot, lai atklātu jaunus zāļu mērķus, novērtētu zāļu proteīnu mijiedarbību utt.
6. Olbaltumvielu funkciju izpēte:
Marķējumu ieviešana būtiski neietekmē proteīnu dabisko struktūru un funkcijas, un tāpēc to var izmantot, lai pētītu proteīnu bioloģiskās funkcijas, subcelulāro lokalizāciju, mijiedarbību un signālu pārraidi. Ieviešot 3X FLAG PEPTIDE tagu, var veikt padziļinātu-proteīnu bioloģisko īpašību izpēti, kas palīdz atklāt to darbības mehānismus šūnu bioloģijā un fizioloģijā.
3XFLAG peptīdsir peptīds, kas satur 8 aminoskābes ar secību DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK. To parasti izmanto kā proteīna marķējumu ērtai mērķa proteīnu attīrīšanai, noteikšanai un izpētei. Biosintēzes procesā to var pagatavot ar ķīmiskās sintēzes vai gēnu inženierijas metodēm. Tālāk ir sniegti detalizēti gēnu inženierijas metožu soļi:
1. Izstrādājiet un sintezējiet gēnus:
Pirmkārt, ir jāizstrādā mākslīgs gēns, kas satur 3X FLAG PEPTIDE secību. Šim gēnam jāsatur 3X FLAG PEPTIDE secība, kā arī atbilstošie promotori, terminatori un atlases marķieri (piemēram, antibiotiku tolerances gēni). Izstrādājot gēnus, jāņem vērā mērķa saimniekorganisma īpašības un ekspresijas vajadzības.
2. Gēnu klonēšana:
Pēc tam izstrādātie mākslīgie gēni tiks klonēti atbilstošos ekspresijas vektoros. Parasti izmantotie vektori ietver plazmīdas, vīrusu vektorus utt. Klonēšanas process parasti ietver šādas darbības:
-PCR amplifikācija: izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju (PCR), lai pastiprinātu mērķa gēnu secību no veidnes DNS.
-Gremošana un savienojums: PCR produkti tiek sagremoti ar ekspresijas vektoriem, izmantojot restrikcijas endonukleāzes, un pēc tam savienoti kopā ar DNS ligāzēm.
-Transformācija: savienotā ekspresijas vektora pārveide par baktēriju saimniekiem, piemēram, Escherichia coli, lai izveidotu rekombinantu plazmīdu.
-Identifikācija: rekombinantās plazmīdas tika identificētas, izmantojot PCR, fermentu sagremošanu, DNS sekvencēšanu un citas metodes, lai apstiprinātu, ka mērķa gēns ir veiksmīgi klonēts vektorā.
3. Ekspresijas mērķa proteīns:
Transfektējiet izveidoto ekspresijas vektoru mērķa saimniekšūnās, piemēram, zīdītāju šūnās, rauga šūnās, kukaiņu šūnās utt. Šūnās ekspresijas vektors tiek transkribēts mRNS un pēc tam pārveidots proteīnos. 3X FLAG PEPTĪDS tiks ekspresēts kopā ar mērķa proteīnu kā proteīna marķējums.
4. Olbaltumvielu ekstrakcija:
Savāc transfektētās šūnas un veic šūnu fragmentāciju, centrifugēšanu un citas apstrādes, lai iegūtu kopējo proteīna ekstraktu.
5. Attīrīts proteīns:
Izmantojot afinitātes attīrīšanas metodes, piemēram, imunoprecipitāciju un afinitātes hromatogrāfiju, no kopējā ekstrakta tika attīrīti mērķa proteīni, kas satur 3X FLAG PEPTIDE marķējumus. Tas parasti ietver anti-FLAG antivielu saistīšanu ar proteīniem, kas satur 3X FLAG PEPTĪDU, un pēc tam to atdalīšanu, izmantojot afinitātes hromatogrāfijas kolonnas vai magnētiskās lodītes.
6. Nosakiet proteīnus:
Attīrītais proteīns tika identificēts un kvantitatīvi noteikts, izmantojot SDS{0}}PAGE gēla elektroforēzi, imūnblotēšanu, masas spektrometriju un citas tehnoloģijas, lai nodrošinātu tā tīrību un integritāti.
Blakusparādības
Biomedicīnas pētījumos un ar proteīniem saistītos eksperimentos marķējuma peptīdiem ir izšķiroša nozīme. Tie var palīdzēt pētniekiem attīrīt, atklāt un atrast mērķa proteīnus, ievērojami veicinot proteīnu zinātnes attīstību.3XFLAG peptīdsir izplatīts un plaši izmantots tagu peptīds, kas sastāv no trim atkārtotām FLAG tagu sekvencēm. FLAG tagu sākotnēji izstrādāja Hopp et al. 1988. gadā un vēlāk attīstījās tādos variantos kā 3XFLAG, kam ir augsta afinitāte un specifiskums un kas var saistīties ar specifiskām antivielām, atvieglojot turpmāku izolāciju un identificēšanu. Lai gan 3XFLAG eksperimentos ir devis daudzas ērtības, tāpat kā citi bioloģiskie aģenti, tas var izraisīt arī dažas nevēlamas reakcijas.
Ar imūnsistēmu saistītas nevēlamas reakcijas
Imunogenitāte
Imunogenitāte attiecas uz vielas spēju stimulēt organisma imūnsistēmu, lai radītu imūnreakciju. . 3XFLAG kā eksogēnu peptīdu segmentu organisma imūnsistēma var atpazīt kā "nepašu" komponentu, tādējādi izraisot imūnreakciju. Lai gan 3XFLAG secība ir salīdzinoši īsa, dažos gadījumos tā joprojām var aktivizēt B šūnas un T šūnas, izraisot antivielu veidošanos. Šīs antivielas ne tikai saistās ar brīvo 3XFLAG, bet arī var atpazīt un saistīties ar saplūsmes proteīniem, kas ekspresē 3XFLAG tagu, ietekmējot saplūsmes proteīna normālu darbību un sadalījumu.
Alerģiskas reakcijas
Alerģiska reakcija ir patoloģiska imūnās atbildes reakcija, ko izraisa imūnsistēmas pārmērīga jutība pret noteiktiem alergēniem. Atsevišķām personām var rasties alerģiskas reakcijas, lietojot 3XFLAG eksperimentiem vai ārstēšanai. Alerģisko reakciju simptomu smagums ir atšķirīgs. Vieglos gadījumos var rasties lokāli simptomi, piemēram, nieze, izsitumi un eritēma, savukārt smagos gadījumos var rasties sistēmiskas alerģiskas reakcijas, piemēram, anafilaktiskais šoks, kam raksturīgs straujš asinsspiediena pazemināšanās, apgrūtināta elpošana un samaņas zudums, kas nopietni apdraud dzīvības drošību.
Alerģiskas reakcijas
Alerģisko reakciju mehānisms galvenokārt ir saistīts ar IgE antivielām imūnsistēmā. Kad organisms pirmo reizi saskaras ar 3XFLAG, imūnsistēma to atpazīst kā alergēnu un stimulē B šūnas ražot specifiskas IgE antivielas. Šīs IgE antivielas piestiprinās pie tuklo šūnu un eozinofilu virsmas. Kad ķermenis atkal nonāk saskarē ar 3XFLAG, tas saistās ar IgE antivielām uz šūnu virsmas, izraisot tuklo šūnu un eozinofilu, lai atbrīvotu bioaktīvos mediatorus, piemēram, histamīnu un leikotriēnus, izraisot alerģisku simptomu rašanos.
Autoimūno slimību risks
Ilgstoša vai atkārtota 3XFLAG iedarbība var palielināt autoimūno slimību attīstības risku. Autoimūnas slimības attiecas uz slimības veidu, kurā ķermeņa imūnsistēma kļūdaini uzbrūk saviem audiem un orgāniem, izraisot audu bojājumus un funkcionālus traucējumus. 3XFLAG var izraisīt imūnsistēmu ražot krusteniski reaģējošas antivielas un T šūnas, izmantojot molekulārās simulācijas mehānismu, kur tās aminoskābju secība ir līdzīga noteiktu olbaltumvielu secībai organismā.
Šīs imūnās šūnas un antivielas ne tikai uzbrūk svešai 3XFLAG, bet arī netīšām bojā organisma normālos audus, izraisot autoimūnas slimības. Piemēram, noteiktas autoimūnas slimības, piemēram, sistēmiskā sarkanā vilkēde un reimatoīdais artrīts, var būt saistītas ar eksogēnu vielu izraisītām autoimūnām reakcijām. Lai gan pašlaik nav skaidru pierādījumu, kas liecinātu, ka 3XFLAG tieši izraisa autoimūnas slimības, šo iespējamo risku nevar ignorēt.
Ietekme uz šūnu darbību
Dažos eksperimentālos pētījumos ir konstatēts, ka lielai 3XFLAG koncentrācijai var būt toksiska ietekme uz šūnām. Citotoksicitātes izpausmes ietver izmaiņas šūnu morfoloģijā, šūnu membrānas integritātes traucējumus, intracelulāro enzīmu aktivitātes izmaiņas un šūnu proliferācijas kavēšanu. Tās darbības mehānisms var būt saistīts ar mijiedarbību starp 3XFLAG un šūnu membrānu. Pateicoties spēcīgajam 3XFLAG negatīvajam lādiņam,
tas var saistīties ar pozitīvi lādētiem šūnu membrānas komponentiem elektrostatiskas mijiedarbības rezultātā, mainot šūnas membrānas caurlaidību un plūstamību, izraisot intracelulāro vielu noplūdi vai kaitīgu vielu iekļūšanu no ārpuses, tādējādi ietekmējot šūnas normālās fizioloģiskās funkcijas. Turklāt 3XFLAG var iekļūt arī šūnu iekšpusē, traucēt signalizācijas ceļiem, proteīnu sintēzi un citiem procesiem, vēl vairāk saasinot šūnu bojājumus.
Ietekme uz šūnu signalizācijas ceļiem
3XFLAG var traucēt intracelulāros signalizācijas ceļus un ietekmēt normālu šūnu fizioloģisko darbību. Šūnu signalizācijas ceļš ir kolektīvs termins, kas apzīmē virkni molekulāru notikumu, kuros šūnas reaģē uz ārējiem stimuliem, regulējot tādus svarīgus procesus kā šūnu augšana, diferenciācija un apoptoze. 3XFLAG var traucēt normālu signālu pārraides ceļu pārraidi, mijiedarbojoties ar signalizācijas ceļa galvenajām molekulām, mainot signālu pārraides aktivitāti vai ekspresijas līmeni.
Piemēram, tas var saistīties ar receptoriem uz šūnas virsmas, konkurētspējīgi kavējot dabisko ligandu saistīšanos ar receptoriem un bloķējot signāla pārraidi; Alternatīvi, tas var iekļūt šūnā un saistīties ar signālu transdukcijas proteīniem, ietekmējot olbaltumvielu fosforilāciju, defosforilāciju un citus modifikācijas procesus, traucējot signāla pārraidi un pastiprināšanu. Šis traucējums šūnu signalizācijas ceļiem var izraisīt šūnu disfunkciju, ietekmējot tādus procesus kā šūnu proliferācija, diferenciācija un apoptoze, kas savukārt var nelabvēlīgi ietekmēt audu un orgānu normālu attīstību un darbību.
Ietekme uz šūnu metabolismu
Šūnu metabolisms ir vispārīgs termins virknei ķīmisku reakciju, kas notiek šūnās, nodrošinot enerģiju un materiālu pamatu šūnu dzīvības aktivitātēm{0}}XFLAG var ietekmēt šūnu vielmaiņas procesus, traucēt šūnu enerģijas ražošanu un vielu sintēzi. Piemēram, tas var ietekmēt mitohondriju darbību, kas ir galvenās aerobās elpošanas un enerģijas ražošanas vietas šūnās. 3XFLAG var mainīt mitohondriju membrānas caurlaidību un potenciālu, mijiedarbojoties ar proteīniem vai lipīdiem uz membrānas, ietekmējot mitohondriju elpošanas ķēdes funkciju un ATP sintēzi,
kas izraisa nepietiekamu šūnu enerģijas piegādi. Turklāt3XFLAG peptīdsvar traucēt arī intracelulāros procesus, piemēram, glikozes metabolismu un lipīdu metabolismu, ietekmējot vielu sintēzes un sadalīšanās līdzsvaru šūnās un negatīvi ietekmējot normālu šūnu fizioloģiskās funkcijas.
Bieži uzdotie jautājumi
Kas ir 3X KAROGS?
+
-
3X FLAG peptīds ir sintētisks peptīds ar 23 aminoskābju atlikumiem. Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp motīvs peptīdā atkārtojas trīs reizes. Astoņas aminoskābes C-galā veido klasisko FLAG secību (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).
Kāda ir atšķirība starp flag{0}}tag un 3xflag?
+
-
Flag-tag ir viena 8 aminoskābju secība, ko parasti izmanto imunoprecipitācijā, Western blot un imunofluorescences lietojumos. Turpretim 3x Flag-tag satur 22 aminoskābes, nodrošinot tai lielāku afinitāti pret anti-Flag antivielām un padarot to īpaši izdevīgu olbaltumvielu attīrīšanas darbplūsmās.
Kā izšķīdināt 3X KAROGU?
+
-
Lai pagatavotu izejas šķīdumu, izšķīdina TBS (50 mM Tris-HCl, pH 7,4, ar 150 mM NaCl) koncentrācijā 5 mg/ml. Sadaliet alikvotā veidā un uzglabājiet –20 grādu temperatūrā. Atkārtota sasaldēšana un atkausēšana nav ieteicama.
Populāri tagi: 3xflag peptīds cas 402750-12-3, piegādātāji, ražotāji, rūpnīca, vairumtirdzniecība, pirkt, cena, vairumā, pārdošanai